PRM（PARALLEL REACTION MONITORING）靶向蛋白質(zhì)組學(xué)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
PRM（parallel reaction monitoring）靶向蛋白質(zhì)組學(xué)是一項(xiàng)基于質(zhì)譜檢測(cè)的全新精準(zhǔn)靶向定量技術(shù)，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確性高等特點(diǎn)。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
PRM技術(shù)適用性廣，無(wú)物種限制，且通量高，可一次性檢測(cè)20-100個(gè)目標(biāo)蛋白質(zhì)，極大節(jié)省樣本及實(shí)驗(yàn)成本。
靈敏度高，可達(dá)ppm級(jí)別，線性范圍可達(dá)5-6個(gè)數(shù)量級(jí)。
特異性高，可精細(xì)區(qū)分亞型、修飾位點(diǎn)、突變位點(diǎn)等精細(xì)序列差異。
PRM靶向蛋白質(zhì)組學(xué)與Western Blot對(duì)比
Western Blot | PRM | |
實(shí)驗(yàn)原理 | 抗原抗體結(jié)合，通過(guò)通過(guò)檢測(cè)抗體含量間接獲得目的蛋白表達(dá)量 | 通過(guò)質(zhì)譜對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的肽段進(jìn)行選擇性監(jiān)測(cè)和碎裂分析，對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行定量 |
檢測(cè)范圍 | 依賴抗體特異性，有物種限制 | 無(wú)物種限制 |
檢測(cè)通量 | 1個(gè)目標(biāo)蛋白/次 | 20-100個(gè)目標(biāo)蛋白/次 |
重復(fù)性 | 人工操作，干擾因素多 | 標(biāo)準(zhǔn)化儀器操作，可重復(fù)性好 |
儀器平臺(tái)
Thermo Q Exactive HF（X）
服務(wù)流程
推薦組合產(chǎn)品
DIA+PRM
PRM送樣建議
| 樣本類(lèi)型 | 推薦起始量 | 建議樣品處理流程 |
細(xì)胞 | >5×106
| 貼壁細(xì)胞 1.傾掉培養(yǎng)基，用PBS清洗3次，加入胰酶； 2.消化好的細(xì)胞轉(zhuǎn)入EP管，室溫3000 g離心5 min，棄掉上清； 3.PBS清洗3次，上清吸凈，細(xì)胞沉淀立即-80℃冰箱儲(chǔ)存。 或者 1.傾掉培養(yǎng)基，用PBS清洗3次后加入裂解液； 2.細(xì)胞刮刮細(xì)胞培養(yǎng)板，收集細(xì)胞裂解液，立即-80℃冰箱儲(chǔ)存。 懸浮細(xì)胞 1. 3000×g離心5min收集細(xì)胞沉淀； 2.PBS清洗3次，立即-80℃冰箱儲(chǔ)存。 |
動(dòng)物組織 | >15mg | 1.取目標(biāo)部位組織，迅速取材且大小均一，將組織切成0.5cm左右的小塊； 2.組織小塊浸入PBS，洗掉組織中殘留的血； 3.用無(wú)塵紙吸凈表面的液體，立即-80℃冰箱儲(chǔ)存。 |
植物組織 | >50mg | 1.選取干凈的目標(biāo)部位組織，迅速取材且保證取材均一；將組織剪成0.5cm左右的小塊； 2.組織立即-80℃冰箱儲(chǔ)存。 |
微生物 | >20mg | 1.收集菌體培養(yǎng)物，3000g離心5min，棄掉培養(yǎng)基； 2.PBS清洗3次，保留細(xì)菌沉淀，-80℃冰箱儲(chǔ)存。 |
血清/血漿 | >50μL | 血清 取普通采血管收集血液，室溫靜置，上層洗出的液體即為血清。 血漿 取抗凝采血管收集血液，使血液與管壁充分接觸，1000×g 4℃離心10-15min,上層即為血漿。 |
案例分析
顱內(nèi)動(dòng)脈瘤（Intracranial aneurysm，IA）是一種人群內(nèi)發(fā)病率較高的疾病，占到普通人群的2-3%。目前針對(duì)IA的診斷，尚依賴于影像學(xué)判斷如數(shù)字減影血管造影（DSA），但DSA成本高、效率低，且DSA檢查的有創(chuàng)性和形態(tài)學(xué)參數(shù)的寬泛性并不適合精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的要求。而目前針對(duì)IA，尚無(wú)可用于預(yù)測(cè)的標(biāo)志物。
復(fù)旦大學(xué)劉曉慧課題組在EMBO Molecular Medicine雜志在線發(fā)表一篇題為：Circulating proteomic panels for risk stratification of intracranial aneurysm and its rupture的論文，通過(guò)DIA+PRM的全面血清標(biāo)志物篩選及驗(yàn)證方法，揭示了可能存在的顱內(nèi)動(dòng)脈瘤臨床血清標(biāo)志物以及疾病發(fā)生發(fā)展可能的機(jī)制。
研究者首先針對(duì)IA的手術(shù)切除組織和血清開(kāi)展系統(tǒng)的DIA蛋白質(zhì)組學(xué)研究，建立了目前已報(bào)導(dǎo)鑒定量全面的動(dòng)脈瘤組織和血清輪廓譜，在組織和血清中分別鑒定到5915個(gè)蛋白質(zhì)和1557個(gè)蛋白質(zhì)，分別找到724個(gè)差異蛋白和144個(gè)差異蛋白。在此基礎(chǔ)上，在大規(guī)模血清隊(duì)列中進(jìn)行PRM驗(yàn)證，構(gòu)建了一個(gè)全面的IA潛在血清蛋白質(zhì)標(biāo)志物數(shù)據(jù)庫(kù)。
