DIA（Data Independent Acquisition）磷酸化蛋白質組學
產品簡介
蛋白質磷酸化是一種常見的蛋白質翻譯后修飾形式，蛋白質磷酸化主要涉及與絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基側鏈形成磷酸酯鍵，這些磷酸化過程在細胞信號傳導和細胞命運調控過程中起著關鍵作用。磷酸化蛋白組的研究不僅僅是針對單一蛋白質或少數蛋白質的磷酸化位點分析，而是旨在全面地鑒定和量化細胞、組織或生物體中所有蛋白質的磷酸化狀態。通過磷酸化蛋白組可以了解蛋白表達及發揮功能的調控機制，以及發現與疾病相關的磷酸化蛋白質，進而為新藥物的研發提供潛在的靶點。
發生磷酸化修飾的氨基酸上共價連接磷酸基團，其分子質量會增加79.97Da。基于數據非依賴采集（Data-Independent Acquisition，DIA）技術，無偏向性采集質譜掃描范圍內所有信號，可測定分子量是否發生79.97Da的質量偏移，從而檢測磷酸化修飾肽段及位點。
技術優勢
1.基于DIA數據采集模式，大大減少高豐度干擾，全面采集高低豐度信號，數據覆蓋度顯著提高。
2.提供上游激酶分析，助力客戶發現潛在的藥物靶點。
3.系統解決方案-提供蛋白組和磷酸化蛋白組聯合分析，實現科研一站式服務。
儀器平臺
TimsTOF fleX
Astral
TimsTOF Pro2
服務流程
分析內容
標準分析內容 | |
質控評價 | QC樣本評價；組間樣本鑒定評價；樣本定量波動評價；DIA體系評價 |
蛋白質鑒定分析 | 鑒定與定量結果統計；單個樣本蛋白質鑒定結果統計；韋恩圖；主成分分析；蛋白質豐度分析 |
差異蛋白分析 | 差異蛋白統計；火山圖；箱線圖；聚類熱圖 |
功能分析 | 亞細胞定位；GO富集分析；KEGG/Reactome通路分析；GSEA分析；轉錄因子分析；互作網絡分析； |
激酶分析 | 激酶注釋、激酶-底物關系分析、KSEA分析、激酶樹注釋 |
個性化分析 | 與客戶協商后按實際情況執行 |
推薦組合
DIA蛋白組+磷酸化蛋白組
送樣建議
樣本類型 | 推薦起始量 | 建議樣品處理流程 |
細胞 | >5×106
| 貼壁細胞 1.傾掉培養基，用PBS清洗3次，加入胰酶； 2.消化好的細胞轉入EP管，室溫3000 g離心5 min，棄掉上清； 3.PBS清洗3次，上清吸凈，細胞沉淀立即-80℃冰箱儲存。 或者 1.傾掉培養基，用PBS清洗3次后加入裂解液； 2.細胞刮刮細胞培養板，收集細胞裂解液，立即-80℃冰箱儲存。 懸浮細胞 1.3000×g離心5min收集細胞沉淀； 2.PBS清洗3次，立即-80℃冰箱儲存。 |
動物組織 | >30mg | 1.取目標部位組織，迅速取材且大小均一，將組織切成0.5cm左右的小塊； 2.組織小塊浸入PBS，洗掉組織中殘留的血； 3.用無塵紙吸凈表面的液體，立即-80℃冰箱儲存。 |
植物組織 | >2g
| 1.選取干凈的目標部位組織，迅速取材且保證取材均一；將組織剪成0.5cm左右的小塊； 2.組織立即-80℃冰箱儲存。 |
微生物 | >120mg | 1.收集菌體培養物，3000g離心5min，棄掉培養基； 2.PBS清洗3次，保留細菌沉淀，-80℃冰箱儲存。 |
血清/血漿 | >100μL | 血清 取普通采血管收集血液，室溫靜置，上層洗出的液體即為血清。 血漿 取抗凝采血管收集血液，使血液與管壁充分接觸，1000×g 4℃離心10-15min，上層即為血漿。 |
案例分析
