TMT（Tandem Mass Tag?）標記蛋白質組學
產品簡介
TMT（Tandem Mass Tag?）標記蛋白質組學是一種基于體外同位素標記的定量蛋白質組學技術，由ThermoFisher Scientific公司研發。TMT采用一系列重量不同的化學標簽，這些標簽能夠特異性地結合到肽段的氨基基團上。通過這種方法，可以同時處理多個樣本，并將樣本混合在一起進行質譜分析。TMT技術允許多達16個不同的樣品同時進行定量分析，因此是蛋白質組學研究中的一個強大工具。
技術優勢
1.技術成熟，應用廣泛。
2.同時檢測多個樣品，實驗、數據分析難度低。
3.適用于絕大多數類型組織、細胞、體液。
TMT適用條件
1.樣本類型：除糞便、腸道內容物等雜質極高的樣本外，基本都適用。
2.客戶樣本數量少于16個并且想盡可能多的鑒定出蛋白，優先選擇TMT。
3.客戶樣本數量大于16個不建議TMT，優先選擇DIA。
4.磷酸化修飾可以選用TMT，其他類型的翻譯后修飾不建議。
儀器平臺
Thermo Scientific Orbitrap Astral
服務流程
分析內容
標準分析內容 | |
質控評價 | 肽段離子質量偏差分布、肽段例子得分分布、蛋白質豐度比分布 |
蛋白質鑒定分析 | 鑒定與定量結果統計；單個樣本蛋白質鑒定結果統計；韋恩圖 |
差異蛋白分析 | 差異蛋白統計；火山圖；聚類熱圖 |
功能分析 | 亞細胞定位；GO富集分析；KEGG/Reactome通路分析；互作網絡分析； |
個性化分析 | 與客戶協商后按實際情況執行 |
送樣建議
樣本類型 | 推薦起始量 | 建議樣品處理流程 |
細胞 | >1×107
| 貼壁細胞 1.傾掉培養基，用PBS清洗3次，加入胰酶； 2.消化好的細胞轉入EP管，室溫3000 g離心5 min，棄掉上清； 3.PBS清洗3次，上清吸凈，細胞沉淀立即-80℃冰箱儲存。 或者 1.傾掉培養基，用PBS清洗3次后加入裂解液； 2.細胞刮刮細胞培養板，收集細胞裂解液，立即-80℃冰箱儲存。
懸浮細胞 1. 3000×g離心5min收集細胞沉淀； 2.PBS清洗3次，立即-80℃冰箱儲存。 |
動物組織 | >30mg | 1.取目標部位組織，迅速取材且大小均一，將組織切成0.5cm左右的小塊； 2.組織小塊浸入PBS，洗掉組織中殘留的血； 3.用無塵紙吸凈表面的液體，立即-80℃冰箱儲存。 |
植物組織 | >100mg | 1.選取干凈的目標部位組織，迅速取材且保證取材均一；將組織剪成0.5cm左右的小塊； 2.組織立即-80℃冰箱儲存。 |
微生物 | >50mg | 1.收集菌體培養物，3000g離心5min，棄掉培養基； 2.PBS清洗3次，保留細菌沉淀，-80℃冰箱儲存。 |
血清/血漿 | >100μL | 血清 取普通采血管收集血液，室溫靜置，上層洗出的液體即為血清。 血漿 取抗凝采血管收集血液，使血液與管壁充分接觸，1000×g 4℃離心10-15min,上層即為血漿。 |
結果展示
案例分析
西湖大學生命科學學院郭天南課題組與合作團隊在Cell在線發表了題為：Multi-organ Proteomic Landscape of COVID-19 Autopsies的研究論文，繪制了2020年初因新冠肺炎去世的患者體內多器官組織樣本中蛋白質分子病理全景圖。該團隊收集了19例新冠去世患者的肺、脾、肝、心臟、腎臟、甲狀腺和睪丸等七種器官的組織樣本，基于TMT標記蛋白質組學鑒定了11394個人源蛋白質分子，這是在全球范圍內初次從蛋白質分子水平上，對新冠患者多個關鍵器官針對新冠病毒感染做出的響應進行了詳細和系統的分析，為臨床工作者和研究人員制定治療方案、開發新的藥物及治療方法提供了線索和依據。
